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硫酸铵PCR缓冲液常用于增强引物特异性并优化DNA聚合酶活性。
硫酸铵PCR缓冲液 – 成分
| 名称 | 分子式 | 浓度 | CAS号 |
|---|---|---|---|
| 硫酸铵 | (NH₄)₂SO₄ | 20 mM | 7783-20-2 |
| Tris-Cl (pH 8.8) | C₄H₁₁NO₃ | 75 mM | 77-86-1 |
| 氯化镁 | MgCl₂ | 2 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
灭菌与储存
- 灭菌：0.22 μm过滤。
- 储存：分装后-20 °C冷冻保存。
操作提示
- 缓冲液pH通常为8.0–9.5，可通过Tris-Cl调节。
- Triton X-100极粘稠，建议使用低浓度储备液，也可用Tween 20替代。
- 使用硫酸铵配制时，MgCl₂浓度通常较高（2.0 ± 0.5 mM）。
- NH₄⁺与Mg²⁺具有拮抗效应，含硫酸铵的缓冲液在不同Mg²⁺浓度下表现出更高引物特异性。
- 铵离子能破坏错配引物-模板之间的氢键，从而增强反应特异性。
- 最佳PCR缓冲液取决于DNA聚合酶类型，请遵循供应商建议。
- 直接使用无水氯化镁配制时会放热，建议少量多次加入部分溶剂中。
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